口腔拭子DNA基因组提取指南

口腔拭子基因组 DNA提取试剂盒操作指南 深圳市华晨阳科技有限公司 版本号：20170328 实验准备 1. 口拭子 2. 移液器及配套无菌枪头（200 μl ，1ml），2 ml离心管 3. 无水乙醇 4. 涡旋振荡器，金属浴/水浴，台式离心机 注意：为了保证样本不被食物或者饮料污染，取样前30 min内请勿进食和饮水。 实验准备-试剂盒准备 使用前先在漂洗液PW和GD中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。 Step 1 取样方式：使用棉签在面颊内擦拭10次。 将棉签转置于2 ml离心管中，用剪刀 加入400 μl缓冲液GA。 将棉签部分从其杆上剪下或折断 （根据棉签使用说明操作） Step 2 加入20 μl Proteinase K溶液， 56放置60 min 涡旋10 sec混匀 其间每15 min涡旋混匀数次。 Step 3 加入400 μl缓冲液GB， 70放置10 min，此时 简短离心，吸取溶液（用 充分颠倒混匀 溶液应变清亮 枪头挤压拭子），将尽可 能多的裂解液转移。 Step 4 加200 μl无水乙醇，充分颠倒混匀， 简短离心以去除管盖内壁的液滴。 注意：加入无水乙醇后可能会出现絮状沉 淀，但不影响DNA提取。 Step 5 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱 CR2中（吸附柱CR2放入收集管中） 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec ，倒掉收集 管中的废液，将吸附柱CR2放回收集管中。 Step 6 向吸附柱CR2中加入500 μl缓冲液GD （使用前请 先检查是否已加入无水乙醇）， 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec ，弃废液， 将吸附柱CR2放回收集管中。 Step 7 向吸附柱CR2中加入600 μl 漂洗液PW （使用前 请先检查是否已加入无水乙醇）， 12,000 rpm (~13,400×g)离心30 sec ，弃废液， 将吸附柱CR2放回收集管中。 Step 8 重复操作步骤7。 Step 9 12,000 rpm(~13,400×g )离心2 min ，倒掉废液。 吸附柱CR2室温放置2 min 彻底晾干吸附材料中残余 的漂洗液。 注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。 Step 10 吸附柱CR2转入试剂盒配套的1.5 ml离心管中，向吸附膜中间位